應(yīng)用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡觀察多種生物活性物質(zhì)對(duì)門細(xì)胞內(nèi)鈣的影響

細(xì)胞內(nèi)離于鈣濃度的變化是鈣信號(hào)作為細(xì)胞通訊第二信使的物質(zhì)基礎(chǔ)，因而測(cè)定靜止態(tài)和激活態(tài)細(xì)胞中離子鈣濃度十分重要。過去，人們采用生物發(fā)光蛋白、金屬餡指示劑、ca’選擇性微電極等方法只能采用微注射方法觀察少數(shù)大型細(xì)胞的離子鈣。80年代以來，隨著ca2’特異熒光指示劑和顯微熒光光度計(jì)的聯(lián)合應(yīng)用，人們才開始通過對(duì)細(xì)胞無刨性納（：az’測(cè)定方法研究ca”信號(hào)。直到zui近幾年，徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡的應(yīng)用大大加速了人們對(duì)單個(gè)細(xì)胞離子鈣及其亞細(xì)胞區(qū)域分布的研究。應(yīng)用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡和ca”特異的熒光指示劑f1Mo—3，可觀察多種生物活性物質(zhì)對(duì)1。I工—PN細(xì)胞離子鈣的影響。I上c—PKl細(xì)胞是來源十豬腎小管1：皮的細(xì)胞系，已得到學(xué)術(shù)界的*。它與近端小管上皮細(xì)胞有一些相同的轉(zhuǎn)運(yùn)功能，而其對(duì)刺激的反應(yīng)卻與亨氏拌升支粗段相似。因此，人們常用N上PRl細(xì)胞代替近端小管上皮細(xì)胞研究物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，而代替亨氏拌升文物段上皮細(xì)胞研究其對(duì)激素的反應(yīng)。上也有人應(yīng)用I‘I‘c—PKl細(xì)胞研究腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)鈣信使。u，c—PKl細(xì)胞在20mm以內(nèi)特與外界交換50％的細(xì)胞總鈣，剩余的細(xì)胞鈣與外界交換較侵，稱為侵交換鈣池。在細(xì)胞核、高爾基器以及胞漿的其它區(qū)域，均包括快交換鈣池和慢交換鈣他兩部分。

徠卡激光共聚焦顯微鏡用精氨酸加壓素（AvP），在富鈣環(huán)境中培養(yǎng)的I，I，c—PKl細(xì)胞如果不受外界刺激，其細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的離子鈣濃度是一樣的；受到AvP、ATP或EIrF刺激后，細(xì)胞總離于鈣過性增高刷巳細(xì)胞核離子鈣升高較細(xì)胞質(zhì)離子鈣升高更為突出。然而，在無鈣的條件r培養(yǎng)兒I‘cPxl細(xì)胞受刺激后雖然仍出現(xiàn)一過性的總離子鈣升高，但細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)離子鈣升高的幅度差別不大。在徠卡激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，無論在無鈣還是富鈣的環(huán)境中，而用AVP預(yù)處理后，再用人TP刺激N。C—PKl細(xì)胞所引起的離子鈣變化總不如未用AvP處理時(shí)。不同生物活性物質(zhì)的受體類型不同，它們和1用的磷酸脂酶c同工酶也不同，從而導(dǎo)致不同鈣庫的動(dòng)員。

備注：應(yīng)用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡觀察多種生物活性物質(zhì)對(duì)門細(xì)胞內(nèi)鈣的影響的部分技術(shù)文章由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司編輯整理上傳。